31.- Preparación de agar en tubo inclinado y en placa 31.01.2017

Adición del medio de cultivo agar común para su total disolución y preparación para la gelificación.

Calentamiento del medio de cultivo agar común, hasta ebullición, y con agitación.

Toma de 1 mL de Lactobacillus para la siembra en placa.

Adición de 1 mL de la muestra en un tubo.

Emplacado de medio de cultivo agar común.

Adición de 5 mL de medio de cultivo agar común al inóculo anterior de 1 mL de la muestra.

Como se puede observar, los tubos se han llenado con demasiada cantidad de medio de cultivo agar común, pueden servir para una siembra superficial en estría, pero no para la siembra superficial, pues no se llega hasta el final del tubo.

En cambio, como se ha mezclado con la muestra, el excesivo llenado no influye en el crecimiento.

Obsérvese la cantidad de agar que hay que añadir para realizar un cultivo en tubo y que se pueda realizar la punción correctamente para que luego crezcan los microorganismos. La marca negra es orientativa de por dónde llenar el tubo con agar en estado líquido.

30.- Diluciones seriadas de Lactobacillus y utilización del Stomacher

Taramos, pesamos 20 g de Lactobacillus de yogur y completamos con agua destilada hasta 200 mL para realizar una dilución 1/10 de la muestra.

Stomacher-400 Circulator SEWARD.

Este aparato esta especialmente diseñado para análisis microbiológicos de alimentos.

Su elevada recuperación de los microorganismos ofrece una elevadísima reducción del riesgo en la no detección de organismos patológicos, tales como la Salmonella, Listeria, E. coli 02157...

Se utiliza para la homogeneización de quesos, mantequillas, carnes, pescados, helados, chocolate, platos cocinados y compuestos alimenticios.; para medidas de conductividad de alimentos procesados por nitritos y otras sales; para el análisis por absorción atómica de sedimentos de trazos de metales, con un límite muy bajo de detección; para mezcla de polvos cerámicos; para tintes; y en agricultura para análisis de suelos para fertilizantes, estudios herbolarios...

Está diseñado para capacidades entre 80 y 400 mL. Permite mezclas y homogeneizaciones rápidas. Su principio de funcionamiento está basado en la combinación de dos fuerzas mecánicas: aplastamiento y agitación de la muestra.

Introducimos la bolsa con la muestra y dejamos que se realice todo el proceso mecánico dentro del Stomacher durante 1-2 minutos.

Preparamos 5 tubos para hacer las diluciones seriadas. En otro, a parte, pondremos la muestra recién sacada del stomacher, ésta será la primera dilución.

En cada uno de los tubos añadimos 9 mL de agua de peptona como medio de cultivo.

Cogemos 1 mL de la muestra procedente de la bolsa que estuvo en el stomacher y lo añadimos en el primer tubo. Ponemos el tapón, agitamos con las manos o con el vórtex y procedemos a coger 1 mL de esa dilución y pasarlo al 2º tubo con 9 mL de agua de peptona para realizar la 3ª dilución, y así con las demás diluciones.

Diluciones seriadas de Lactobacillus en agua de peptona:
(10 elevado a -1, -2 ... -6).

29.- Tinción con azul de metileno de Proteus y Staphylococcus y Tinción de Gram de E. coli

Tinción con azul de metileno de Proteus y Staphylococcus

Tubos inclinados con medio Kligler para siembra de Proteus y Staphylococcus. 

Tubos inclinados con Proteus y Staphylococcus.

Preparación de todo el material para la tinción con azul de metileno de Proteus.

Toma de la muestra de Proteus para la tinción.

Depósito de la muestra en un porta.

Vista al microscopio de Proteus teñido con azul de metileno.

Preparación de todo el material para la tinción con azul de metileno de Staphylococcus.

Toma de la muestra de Staphylococcus y depósito en un porta para su posterior fijación y tinción.

Fijación con calor de la muestra.

Tinción de Staphylococcus con azul de metileno.

Adición de azul de metileno y reposo unos minutos.

Lavado de la preparación con agua destilada.

Secado al aire de la muestra teñida con azul de metileno.

Vista al microscopio óptico de Staphylococcus teñido con azul de metileno.

Tinción de Gram de E. coli

Tras la toma de muestra de E. coli se procede a su fijación en un porta para la posterior tinción de Gram.

Adición de violeta crital.

Lavado con lugol y mantenimiento de un minuto con él.

Lavado del lugol con agua destilada.

Fijación con etanol.

Lavado con agua destilada.

Adición de safranina y reposo

Lavado con agua destilada.

Observación al microscopio de la preparación teñida de E. coli.

Distintas preparaciones de E. coli vista al microscopio óptico, con objetivo de 100 aumentos, tras su tinción de Gram.