martes, 13 de diciembre de 2016

23.- Preparación de medios de cultivo


  


  


                                 

PROTOCOLO PARA LA PREPARACIÓN DE UN MEDIO DE CULTIVO PARA MEDIO SÓLIDO

MATERIAL:
Papel de filtro
Vidrio de reloj
Cucharilla de metal
Balanza
Vaso de precipitados
Varilla agitadora
Erlenmeyer de 500 mL
Pipeta Pasteur
Probeta de 250 mL
Mechero
Autoclave
Algodón graso
Cinta adhesiva
Papel aluminio
Bolsas de autoclave
Agua destilada
Muestra: Agar Estándar
Agitador magnético con imán (o cazo y placa calefactora)
Pinzas metálicas
Placas Petri
Embudo

PROCEDIMIENTO:
1.- Seguimos el protocolo del Agar Estándar (Suspender 23,5 g en 1 L de agua destilada. Calentar y agitar hasta disolución total. Distribuir y esterilizar a 121ºC durante 15 minutos).

2.- Hacemos los cálculos para 300 mL.

        Si 1000 mL _____ 23,5 g
               300 mL _____   x x= 7,05 g tenemos que pesar

3.- En la balanza, taramos el vidrio de reloj y pesamos 7,05 g de Agar estándar con ayuda de una cucharilla de metal.

4.- Se llena la probeta de 250 mL con agua destilada y se enrasa con una pipeta Pasteur.
Se vacían los 250 mL de agua destilada en un Erlenmeyer de 500 mL. Seguidamente, echamos los 7,05 g de agar estándar en el Erlenmeyer con ayuda de un embudo (o con el vidrio de reloj llevando cuidado de no derramarlo) y volvemos a llenar la probeta con los 50 mL restantes de agua destilada y enrasamos con pipeta Pasteur. Añadimos esa agua destilada al matraz (para completar los 300 mL).

5.- Se coloca un cazo con agua en una placa calefactora (o un agitador magnético con imán) para esterilizar el medio y calentar al baño María el Erlenmeyer con el medio de cultivo hasta homogeneizar (ayudarnos con una varilla agitadora de vez en cuando).

6.- Una vez homogéneo, se apaga la placa calefactora (o el agitador magnético, quitando el imán con unas pinzas de metal) y se coge el Erlenmeyer con unos guantes hasta la mesa de trabajo.

7.- Colocar en el cuello del matraz algodón graso. Tapar con papel de aluminio y cinta adhesiva, y meter en una bolsa de autoclave. Llevar al autoclave a 121ºC durante 15 minutos para esterilizar.

8.- Una vez acabado el autoclavado, llevamos el medio de cultivo a la mesa de trabajo y encendemos el mechero poniéndolo en medio. Vamos cogiendo placas de Petri en las que dispensamos el medio (agitándolas suavemente horizontalmente). Se dejan semiabiertas en la proximidad del mechero.

9.- Cuando se ha evaporado el agua, se cierran, se rotulan (o identifican) y se colocan en posición invertida, guardándolas en la nevera para un posterior uso metidas en una bolsa de autoclave.


 Pesada del agar

Trasvase del agar polvo a la probeta

Trasvase del agar polvo a la probeta

 Agar disuelto en un Erlenmeyer

 Disolución del agar en la placa calefactora y agitación con un imán

 Agar disuelto y placa Petri

Agar disuelto y placa Petri abierta

Detalle del algodón parafinado para que no se contamine el agar

 Emplacado del agar para el cultivo microbiano


Preparación de medios de cultivo


No se dejó reposar el medio de cultivo y no ha conseguido solidificar.

Se vuelve a  preparar de nuevo el medio de cultivo, pero esta vez se esteriliza en el autoclave.

Esterilización del medio de cultivo en el autoclave

Preparación de los parámetros y arranque del autoclave


Medio de cultivo autoclavado (esterilizado)

Medio de cultivo esterilizado listo para emplacar