PROTOCOLO PARA LA PREPARACIÓN DE UN MEDIO DE CULTIVO PARA MEDIO SÓLIDO
MATERIAL:
• Papel de filtro
• Vidrio de reloj
• Cucharilla de metal
• Balanza
• Vaso de precipitados
• Varilla agitadora
• Erlenmeyer de 500 mL
• Pipeta Pasteur
• Probeta de 250 mL
• Mechero
• Autoclave
• Algodón graso
• Cinta adhesiva
• Papel aluminio
• Bolsas de autoclave
• Agua destilada
• Muestra: Agar Estándar
• Agitador magnético con imán (o cazo y placa calefactora)
• Pinzas metálicas
• Placas Petri
• Embudo
PROCEDIMIENTO:
1.- Seguimos el protocolo del Agar Estándar (Suspender 23,5 g en 1 L de agua destilada. Calentar y agitar hasta disolución total. Distribuir y esterilizar a 121ºC durante 15 minutos).
2.- Hacemos los cálculos para 300 mL.
Si 1000 mL _____ 23,5 g
300 mL _____ x x= 7,05 g tenemos que pesar
3.- En la balanza, taramos el vidrio de reloj y pesamos 7,05 g de Agar estándar con ayuda de una cucharilla de metal.
4.- Se llena la probeta de 250 mL con agua destilada y se enrasa con una pipeta Pasteur.
Se vacían los 250 mL de agua destilada en un Erlenmeyer de 500 mL. Seguidamente, echamos los 7,05 g de agar estándar en el Erlenmeyer con ayuda de un embudo (o con el vidrio de reloj llevando cuidado de no derramarlo) y volvemos a llenar la probeta con los 50 mL restantes de agua destilada y enrasamos con pipeta Pasteur. Añadimos esa agua destilada al matraz (para completar los 300 mL).
5.- Se coloca un cazo con agua en una placa calefactora (o un agitador magnético con imán) para esterilizar el medio y calentar al baño María el Erlenmeyer con el medio de cultivo hasta homogeneizar (ayudarnos con una varilla agitadora de vez en cuando).
6.- Una vez homogéneo, se apaga la placa calefactora (o el agitador magnético, quitando el imán con unas pinzas de metal) y se coge el Erlenmeyer con unos guantes hasta la mesa de trabajo.
7.- Colocar en el cuello del matraz algodón graso. Tapar con papel de aluminio y cinta adhesiva, y meter en una bolsa de autoclave. Llevar al autoclave a 121ºC durante 15 minutos para esterilizar.
8.- Una vez acabado el autoclavado, llevamos el medio de cultivo a la mesa de trabajo y encendemos el mechero poniéndolo en medio. Vamos cogiendo placas de Petri en las que dispensamos el medio (agitándolas suavemente horizontalmente). Se dejan semiabiertas en la proximidad del mechero.
9.- Cuando se ha evaporado el agua, se cierran, se rotulan (o identifican) y se colocan en posición invertida, guardándolas en la nevera para un posterior uso metidas en una bolsa de autoclave.
Preparación de medios de cultivo
Se vuelve a preparar de nuevo el medio de cultivo, pero esta vez se esteriliza en el autoclave.
Medio de cultivo autoclavado (esterilizado)
Medio de cultivo esterilizado listo para emplacar
