miércoles, 8 de febrero de 2017

34. Microtomo y tinciones de Cratarellus cornocupioides con azul de metileno y rojo Congo


Colocación del sandwich de Cratarellus cornocupioides en zanahoria



Colocación del sandwich de Cratarellus cornocupioides en corcho blanco





Primer rebanado, con la navaja, de la muestra para allanar la muestra

Segundo corte de la muestra para obtener una película muy fina tras el giro del tornillo para subir la muestra


Triturado de la muestra con el bisturí




Colorantes azul de metileno y rojo Congo



Técnica de tinción con azul de metileno

Preparación del rojo Congo para la tinción y técnica de tinción con rojo Congo



Cratarellus cornocupioides al microscopio óptico teñido con azul de metileno

Cratarellus cornocupioides al microscopio óptico teñido con rojo Congo


viernes, 3 de febrero de 2017

33.- Siembras en medios LEVINE y VRBG

Siembra de E. coli en medio Levine





Cultivos nada más sembrar y 24 horas después de la siembra


E. coli en medio Levine


E. coli en medio agar estándar






E. coli al microscopio óptico tras 24 horas de incubación.


E. coli y Salmonella en medio VRBG y en Agar estándar

Arriba agar estándar y abajo VRBG


miércoles, 1 de febrero de 2017

32.- Preparación de medios de cultivo LEVINE, VERDE BRILLANTE y BILIS-ROJO NEUTRO-VIOLETA CRITAL

Agar Levine EMB


Bote con medio de cultivo. Pesada de 7,5 g del medio para preparar 200 mL de medio líquido. Calentamiento hasta su disolución.

Medio Levine preparado para emplacar.

Emplacado de medio Levine

Placa con medio Levine AMB cultivada

Medio adecuado para la búsqueda y diferenciación de bacilos entéricos, a partir de muestras clínicas, aguas servidas y otros ateriales.
Es recomendado por la American Public Health Association, para el análisis microbiológico de productos lácteos y alimentos, y por la USP para la realización de los ensayos límite microbiológicos.
Fundamento
La fórmula original de este medio de cultivo, fue modificada por Levine, eliminando la sacarosa e incrementando la concentración de lactosa, lo que permite una mejor diferenciación de E. coli.
Es un medio selectivo y diferencial, adecuado para el crecimiento de enterobacterias.
La combinación utilizada de eosina y azul de metileno, inhibe el desarrollo de microorganismos Gram positivos y de bacterias Gram negativas fastidiosas, y también, permite diferenciar bacterias fermentadoras y no fermentadoras de lactosa.
Los microorganismos fermentadores de lactosa, originan colonias de color azulado­negro, con brillo metálico. Las colonias producidas por microorganismos no fermentadores de lactosa son incoloras.
Algunas bacterias Gram positivas (cepas de estafilococos, enterococos) y levaduras, pueden crecer, originando colonias incoloras y puntiformes.
Este medio de cultivo,es útil para la orientación y no confirmación de especies bacterianas (ya que numerosas cepas de Citrobacter spp. producen colonias con brillo metálico), por lo cual será necesario realizar pruebas bioquímicas, para la identificación de género y especie.

Siembra
Directa, estriando la superficie.
Incubación
De 18-­24 horas a 35-­37°C, en aerobiosis.
Resultados

Características del medio
Medio preparado: color púrpura con tonos verdosos, ligeramente opalescente con un precipitado floculento disperso.
Placas preparadas: color púrpura.
La esterilización del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja. El color púrpura se restaura por agitación.
La presencia de un precipitado en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido, ya que es parte esencial del mismo.
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-­35ºC.
Medio preparado: a 2­8ºC.



Agar Verde Brillante

La preparación del medio Verde Brillante es como la anterior.

Placa con medio Verde Brillante cultivada.

Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella spp., excepto S. typhi y S. paratyphi, a partir de muestras clínicas, alimentos, y otros materiales de importancia sanitaria. No se recomienda para el aislamiento
de Shigella spp.
Es de un valor excepcional cuando se investiga un gran número de muestras de heces o alimentos, por su alta capacidad de diferenciación de las colonias sospechosas.
Fundamento
En el medio de cultivo, la pluripeptona y el extracto de levadura, constituyen la fuente de nitrógeno, vitaminas y minerales. La lactosa y la sacarosa son los hidratos de carbono fermentables, el rojo fenol es el indicador de pH, que vira
al amarillo cuando hay producción de ácido a partir de la fermentación de azúcares, el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el verde brillante actúa como agente selectivo.
Siembra
Sembrar en superficie por estriado a partir de una dilución del material a investigar o de un cultivo previo en un medio de enriquecimiento selectivo, como Selenito caldo (B02­120­05) o Tetrationato caldo (B02­145­05).
Para el tratamiento de materia fecal se recomienda hacer cultivo primario en medios menos selectivos, como Salmonella, Shigella agar (B02­138­05), o Mac Conkey agar (B02­114­05).
Incubación
Incubar 24 horas a 35-­37°C.
Resultados
Características del medio
Medio preparado: verde.
Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10­-35ºC.
Medio preparado: a 2­8ºC.
Presentación



Agar Bilis-Rojo Neutro-Violeta Cristal con Glucosa (VRBG)


Bote con medio de cultivo. Pesada de 8,3 g del medio para preparar 200 mL de medio líquido. Calentamiento hasta su disolución.

Placa con medio Bilis-Rojo Neutro-Violeta Cristal con Glucosa y Agar cultivada.

Medio de cultivo utilizado para la detección y el recuento de enterobacterias totales, a partir de alimentos.
Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes necesarios para el crecimiento bacteriano,las sales biliares y el cristal violeta inhiben el desarrollo de la flora acompañante Gram positiva, la glucosa es el hidrato de carbono fermentable, y el rojo neutro es el indicador de pH.
Todas las enterobacterias fermentan la glucosa, esto produce la acidificación del medio y el viraje del indicador de pH al color rojo intenso. Debido a esto, se observan como colonias de color rojo púrpura, de 1 a 2 mm de diámetro, rodeadas, generalmente, de una zona rojiza de bilis precipitada.
Siembra
­ Para recuento bacteriano: sembrar en profundidad 1 mL de la muestra directa o de la dilución apropiada, agregar aproximadamente 12­15 mL de medio de cultivo enfriado a 45ºC, agitar por rotación y dejar solidificar.
Luego, agregar una sobrecapa de medio de cultivo para crear condiciones anaeróbicas de manera que se evite el crecimiento de microorganismos Gram negativos no fermentadores de azúcares y el crecimiento en forma invasiva de Proteus spp.
­ Para propósitos generales: sembrar en superficie, una ansada a partir de los tubos con gas de un medio para coliformes.
Incubación
A 35­-37 ºC durante 18­24 horas, en aerobiosis.
Resultados
Características del medio
Medio preparado: púrpura rojo.
Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10­-35ºC.
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